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配胶缓冲液系统对电泳的影响

在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,分离胶pH8.9,浓缩胶是pH6.7;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电场与电性强度成反比,这一区带便形成了较高的电压梯度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩成一狭窄的区带。当样品进入分离胶后,由于分离胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。

所以,pH对整个反应体系的影响是至关重要的,实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况,应首要考虑该因素,当然其他的因素也可以从多方面考虑。