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沉淀反应

沉淀反应是免疫检测中最早使用的方法它是基于可溶性抗原与相应抗体发生特异性结合而形成大分子抗原-抗体复合物沉淀以此来定性定量测定抗原早在1897Kraus就发现细菌培养液与相应抗血清混合时可发生沉淀反应沉淀反应一般分为二个阶段;第一阶段是抗原抗体特异性结合;第二阶段形成可见的免疫复合物。

1)絮状沉淀反应       絮状沉淀反应是将抗原抗体溶液混合在一起在电解质的存在下抗原与抗体结合下,抗原与抗体结合形成絮状沉淀物。实验过程中需对抗原抗体的比例进行优化后才能产生最佳测定条件。有3种类型的抗体可用于免疫沉淀反应:多克隆抗体、单克隆抗体和混合单克隆抗体。对抗原抗体的比例进行优化的方法有抗原稀释法、抗体稀释法和抗原抗体同时稀释法。抗原稀释法是将可溶性抗原作一系列稀释,与恒定浓度的抗血清等量混合,放在室温或37℃反应后,产生的沉淀物随抗原量的变化而不同。抗体稀释法是釆用恒定量的抗原与不同稀释度的抗体进行反应,计算相应产生的沉淀量,得到抗原抗体最佳反应比。为了取得两者的最佳结合比例,现多釆用抗原抗体同时稀释的方法,又称方阵法或棋盘格法,找出最佳配比。例如抗体用1 : 40,抗原则按1 : 320稀释;如果抗原为1: 160,则抗体为1: 10~1 : 20最为合适。

(2)环状沉淀反应  环状沉淀方法是1902年Ascoli建立的,其具体操作是将抗体加入直径为1.52.0mm的小玻管中,约装1/3高度,再用细长滴管沿管壁滴加抗原溶液。因抗体蛋白浓度高,比重较抗原大,所以两液交界处会形成清晰的界面。此处抗原抗体反应生成的沉淀在一定时间内不下沉。一般在室温下放置10min或数小时,在两液交界处呈现白色环状沉淀为阳性反应,若无沉淀则为阴性反应。此方法的灵敏度在3.020.0mg/L左右。环状沉淀试验中所采用的抗原抗体溶液必须澄清,才能分辨两者反应产生的环状沉淀。该反应的灵敏度较低,且不能作两种以上抗原的分析鉴别,但反应较快、适合于简易条件下的操作。