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免疫分析的方法

根据在免疫分析中是否分离又可分为异相免疫分析和均相免疫分析两大类。

1.异相免疫分析

异相免疫分析是在抗原抗体反应后以物理方法将抗原抗体复合物与游离的抗原、抗体相分离,然后检测与复合物相结合的标记物。经过分离可以有效去除基体中的干扰物质,提高检测的灵敏度和特异性。在异相免疫分析中可采用竞争模式或夹心模式。

竞争异相免疫反应具体步骤是首先将抗体包被于固相载体上,然后用牛血清白蛋白封板以封闭载体表面的活性位点,接着将一定量标记抗原和含有抗原的样品加入容器中,让其与载体表面有限的抗体进行竞争反应,反应一段时间后洗去游离的抗原,由于竞争反应的结果,使结合在载体抗体上的标记抗原的量与样品中抗原的量成反比,由此可测定样品中抗原的含量。

夹心式异相免疫的步骤是将第一抗体包被于固相载体后,将含有抗原的样品加入包被了抗体的容器中,让抗原与抗体进行反应,完成特异性结合反应后洗去未结合的抗原,然后加入标记的第二抗体,使之与固相载体上的抗原继续反应形成夹心式复合物;洗去多余的标记抗体,对固相载体上的夹心复合物上的标记物进行测定,就可以达到测定样品中抗原含量的目的。

2.均相免疫分析

均相免疫分析不必对自由抗原和结合抗原进行分离,使测定步骤更为简化省时,分析费用降低,对样品处理简单,从临床应用的角度是最实用的一种方法。几乎所有的均相免疫分析都采用竞争模式进行测定,其基本原理是根据标记抗原与抗体反应生成抗原-抗体复合物后,标记物的活性降低,导致检测信号值降低。

均相免疫分析特别适合于测定低分子量的化合物如药物、激素等在人体内的浓度。与异相免疫分析相比,其灵敏度约在10-9g/mL,且易受溶液中其他物质的千扰,特别是在结合标记抗原-抗体复合物的存在下检测自由标记抗原。