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SDS-page实验步骤

1)洗玻璃板:

用洗洁精充分洗净玻璃板并沥干。

2)组装玻璃板:

将二块玻璃板叠放整齐,下缘平齐,用夹子夹好两边后固定在底座上。插入配套梳子,在梳子下缘1~2厘米处划线,指示灌胶位置。拔去梳子。

3)配制、灌制分离胶和浓缩胶

具体操作步骤参考其他文章。

4 )样品处理

新鲜样品加入4×loading buffer,混匀。95度或沸水浴5~10 min,可稍微离心后取上清液进行电泳。

5)组装电泳槽

玻璃板取下后,垂直靠在电泳槽里的电源架上,使凝胶板的凹沿面靠向电源架。通常两块凝胶板共用一个电源架。

将凝胶板与电源架按要求固定于电源槽内。加入电泳缓冲液,两块凝胶板中间电源架内(上槽)需加满电泳液,上槽的电泳缓冲液与加入在电泳槽(下槽)中的电泳缓冲液互不相通。轻轻地拔去凝胶板内的梳子。

6)点样

取处理后的样品液,用微量进样器吸取适量样品液,将样品液缓缓加入玻璃板中的梳子孔,注意不要冲散样品。

7)电泳

用二根导线连接电泳槽与电泳仪,注意红色与黑色电极的插头和插口相配。接通电源。

蛋白在浓缩胶中的电压为60 ~80V,蛋白进入分离胶后可将电压调为110~120V。电泳时观察凝胶板上的样品溴酚蓝的色条带走至接近底端时,停止电泳,关闭电源,取出玻璃板。

8)染色

用刀片或薄板将玻璃板外的两块玻璃板轻轻撬开,使凝胶倾伏在其中一块玻璃板上。

用刀片在凝胶左右边缘和上缘分离胶与浓缩胶的交接处,将分离胶切下,并在分离胶的左上角切掉一小角,以标记样品顺序。

然后将分离胶小心移入染色器皿中。加入100 ml 染色液,摇动染色3 ~4小时。

9)脱色

倒去染色液,用清水漂洗几遍染色的凝胶,沥干水后置于脱色液中,摇动脱色至能清晰显示出蛋白条带止,期间需更换几次脱色液。