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单克隆抗体和多克隆抗体

单克隆抗体和多克隆抗体是两种常用的抗体,它们的制备原理、专一性、用途有很大的不同,在价格上也相差甚远。

1.专一性的区别

多克隆抗体(polyclonal antibody)是由多个B淋巴细胞分泌,在免疫反应中,每个B细胞产生的抗体不尽相同,因为抗原通常带有多个表位(抗原决定簇,epitope),而每个B细胞只针对其中的一个表位产生对应的抗体。

单克隆抗体(monoclonal antibody)由B细胞与骨髓瘤细胞杂交融合的杂交瘤细胞产生的,只针对某一特定抗原决定簇,对抗原表位的专一性非常高。

2.制备原理的区别

多克隆抗体的产生是将高纯度的抗原注射到动物体内进行免疫,使免疫动物的B细胞分泌针对该抗原的抗体。最终收集免疫动物的血清纯化后即可得到多克隆抗体。
单克隆抗体的制备在用纯化抗原免疫小鼠产生免疫应答后,还需要将小鼠脾脏细胞取出、与小鼠的骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞株。最后进行细胞培养收集上清或将杂交瘤细胞注入到小鼠腹腔中培养后收集腹水,纯化后获得单克隆抗体。

3.制备周期和价格区别:

多克隆抗体的制备不需要进行细胞培养,因此制备周期就比单克隆抗体的短,首次制备的价格也比单抗的便宜。
4.应用的区别

单克隆抗体制备成功后可以永续的生产完全一致的抗体,便于对其特异性进行全面、系统地验证。但单抗对识别位点有很高的专一性,如果所识别的抗原表位被破坏,单抗就完全无法识别该抗原,实验的结果也将受到极大影响。多克隆抗体在不同制备批次间会存在差异,因而在特异性、一致性方面有一定局限。

在Western Blot检测中,单抗能得到单一漂亮的条带,但信号较弱,使用多抗产生的非特异性条带多,条带信号也比较强。在IHC中多抗的背景较深。在相同条件下,使用多抗可以提高检测的灵敏度,对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。若对抗原的性质比较了解,知道其特定的抗原表位可以选用单抗,如果不是太清楚的话,可以先用多抗,再用单抗检测,避免因少数抗原表位被破坏而完全检测不出得到情况。