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选购ELISA 试剂盒、抗体与蛋白
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ELISA实验条件如何选择

在ELISA中,进行各项实验条件的选择十分重要,包括:

1.固相载体的选择:

载体的种类有多种,如聚苯乙烯,聚氯乙烯和纤维素等,我们通常用的聚苯乙烯塑料微量滴定板,其优点在于吸附蛋白的性能较好,操作简便、用量小、适于大批检测。

2.载体的吸附条件:

载体的吸附均为物理吸附,吸附一般要求PH在9.0~9.6之间。时间、温度、蛋白的浓度、离子的强度一定要恰到好处。一般采用4℃过夜。   

3.酶标抗体使用浓度的确定:

于聚苯乙烯板中加足够的抗体包被温育一定时间, 酶标结合物倍比稀释,找出OD值1,为最合适酶标抗体稀释度。 

4.抗原的要求:

用于ELISA的抗原必须采用相当纯的抗原,如果含有其它杂质,将与抗原共同竞争的固相载体上的有限位置。

5.抗体的要求:

一定是要与抗原对应的抗体,化学结构和空间结构上其具有很高特异性反应。

6.反应时间:

抗原与抗体、抗体与酶标抗体反应一般在37度1~2小时达到高峰。时间太短敏感性下降,时间太长吸附的抗原或复合物可能脱落。


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